Caspase 9是半guangansuan蛋白酶caspase家族CED-3亚家族的成员，在凋亡的执行阶段起着至关重要的作用。这些酶对于天冬氨酸残基后的切割键具有主要的一级特异性。“启动子”胱天蛋白酶（例如胱天蛋白酶8）激活“效应子”胱天蛋白酶，例如胱天蛋白酶3和7。效应子胱天蛋白酶然后裂解细胞底物，zui终导致凋亡的形态学改变。Ac-LEHD-AMC是caspase 9的选择性荧光底物。caspase9诱导的Ac-LEHD-AMC水解导致AMC荧光团的释放，可通过〜365 nm的激发波长和〜〜的发射波长检测到450 nm。可以在由50 mM MES，pH 6.5、10％PEG 8000、0.1％CHAPS，5 mM DTT，

重要的是要存放在<-15°C的环境中，并应存放在阴凉处。

自收到之日起12个月内可以使用。

程序

以下协议仅提供指导，应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1. 在DMSO中准备10 mM的储备溶液。
   

2. 如下准备2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。
   

3. 将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。
   

4. 使用荧光酶标仪读取荧光，或使用酶标仪读取吸光度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1. 在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。
   

2. 根据需要处理细胞。
   

3. 通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）在Hanks中稀释DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X渗透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。
   

4. 将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合（来自步骤2.3），并在37°C，5％CO _2的  培养箱中孵育细胞至少1小时。
   

5. 用HHBS清洗细胞至少一次。
   

6. 通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定 （仅适用于＃13470-13476）

1. 通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。
   

2. 根据需要处理细胞。
   

3. 以1：250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中（例如2 µL至500 µL细胞），并将细胞在37°C，5％CO2的培养箱中孵育1小时。
   

4. 用HHBS清洗细胞至少一次。
   

5. 通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

   13427	Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿	(Ac-LEHD)2-R110	1 mg
   13430	Caspase 3/7荧光底物(Z-DEVD)2-R110 绿	(Z-DEVD)2-R110	1 mg