β-内酰胺酶是一大类能够水解β-内酰胺的酶。β-内酰胺环是所有β-内酰胺抗生素（包括qingmeisu衍生物，toubaojunsu，单bactams和碳青霉烯）中的常见元素。通过水解，β-内酰胺酶会破坏β-内酰胺环的打开，从而使分子的抗菌性能失活。通过合成β-内酰胺酶，来自临床和非临床环境的细菌对β-内酰胺抗生素的耐药性越来越高。为了克服这种耐药性，通常将β-内酰胺酶抑制剂（如克拉维酸）与β-内酰胺类抗生素一起使用。因此，检测β-内酰胺酶活性对于评估β-内酰胺类抗生素以及预防抗生素耐药性至关重要。AAT Bioquest' 比色β-内酰胺酶活性测定试剂盒提供了灵敏的比色测定法，用于测量生物样品中的β-内酰胺酶活性。使用Nitrocefin可以检测到β-内酰胺酶的活性，该酶在被β-内酰胺酶水解后会从黄色变为红色。可以使用吸光度计酶标仪通过测量490 nm至380 nm波长下的OD比率来执行测定。

1. 准备β-内酰胺酶标准品或测试样品（50 µL）

2. 加入β-内酰胺酶工作溶液（50 µL）

3. 在室温下孵育30-60分钟

4. 监测OD比为490/380 nm时的吸光度增加

重要说明
开始实验前，在室温下解冻每个试剂盒成分的小瓶。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，制备后应储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1.β-内酰胺酶标准储备液（50 mU / mL）：
将100 µL ddH ₂ O加入小瓶β-内酰胺酶标准液（组分C）中，制成50 mU / mLβ-内酰胺酶标准液。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

向990 µL 1x PBS缓冲液中加入10 µL 50 mU / mLβ-内酰胺酶标准溶液，以生成500 µU / mLβ-内酰胺酶标准溶液（SD7）。取500 µU / mLβ-内酰胺酶标准溶液（SD7），并在PBS中进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的β-内酰胺酶标准溶液（SD6-SD1）。注意：稀释的β-内酰胺酶标准溶液不稳定，应立即使用。

准备工作溶液

将50 µL硝苯丁酮原液（组分A）加入5 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合，制成β-内酰胺酶工作溶液。注意：此β-内酰胺酶工作溶液足以用于一个96孔板。β-内酰胺酶工作溶液不稳定，每次使用都应准备新鲜。