Cell Meter™检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在监测细胞凋亡，坏死和健康细胞。凋亡被描述为一种主动的，程序性的自动细胞拆卸过程，可避免引起炎症。在细胞凋亡中，磷脂酰siansuan（PS）被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，在观察形态变化之前可以检测到磷脂酰siansuan在细胞表面的出现。该试剂盒中使用的PS传感器与膜PS结合后具有绿色荧光。坏死的特征是被动的 环境扰动导致炎症细胞内容物不受控制释放而导致意外细胞死亡。膜不透性7-AAD（Ex / Em = 546/647 nm）标记核的能力证明，质膜完整性的丧失代表了晚期凋亡和坏死的简单方法。此外，该试剂盒还提供了活细胞细胞质标记染料CytoCalcein™Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于标记活细胞细胞质。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡（绿色），坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。代表了证明晚期细胞凋亡和坏死的简单方法。此外，该试剂盒还提供了活细胞细胞质标记染料CytoCalcein™Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于标记活细胞细胞质。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡（绿色），坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。代表了证明晚期细胞凋亡和坏死的简单方法。此外，该试剂盒还提供了活细胞细胞质标记染料CytoCalcein™Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于标记活细胞细胞质。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡（绿色），坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。

1. 用测试化合物制备细胞（200 µL /样品）

2. 添加Apopxin™Green检测溶液

3. 在室温下孵育30-60分钟

4. 使用流式细胞仪对细胞进行分析，流式细胞仪带有发射滤光片530/30 nm（对于凋亡细胞为FITC通道），450/40 nm（对于健康细胞为Pacific Blue通道）和670/14 nm（对于坏死细胞为PE-Cy5通道）

重要说明
开始实验之前，请在室温下解冻所有试剂盒组件。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，制备后应储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. CytoCalcein™紫罗兰色450储备液（200X）：
在CytoCalcein™紫罗兰色450（成分D）小瓶中加入100 µL DMSO，制成200X CytoCalcein™紫罗兰色450储备液。避光。

程序

用Apopxin™Green准备和孵育细胞：

1. 用测试化合物处理细胞一段所需的时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为4-6小时）以诱导凋亡。
   

2. 离心细胞以获得1-5×10 ⁵细胞/管。
   

3. 将细胞重悬于200 µL分析缓冲液（组分B）中。
   

4. 向细胞中加入2 µL 100X Apopxin™Green（组分A）。
   

5. 可选1：向坏死细胞的细胞中加入1 µL 200X 7-AAD（组分C）。
   

6. 可选2：  然后向细胞中加入1 µL 200X CytoCalcein™Violet 450储备液，以进行健康细胞染色。
   

7. 避光保存，在室温下孵育30至60分钟。
   

8. 在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。
   

9. 使用流式细胞仪监测荧光强度，该流式细胞仪带有发射滤光片530/30 nm（对于凋亡细胞为FITC通道），450/40 nm（对于健康细胞为Pacific Blue通道）和670/14 nm（PE-Cy5通道-坏死细胞）细胞）。

使用流式细胞仪分析细胞：

1. 使用流式细胞仪，用发射滤光片530/30 nm（针对凋亡细胞的FITC通道），450/40 nm（对于健康细胞的Pacific Blue通道）和670/14 nm（对于PE-Cy5通道，针对Apopxin™Green结合）进行定量坏死细胞）。 注意： Apopxin™与贴壁细胞结合的流式细胞仪分析未经过常规测试，因为在细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前已经报道了利用膜联蛋白V在贴壁细胞类型上进行流式细胞术的方法。和van Engelend等。

使用荧光显微镜分析细胞：

1. 孵育后用移液管吸移细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。
   

2. 将细胞添加到载有玻璃盖玻片或黑色墙壁/透明底部96孔微孔板的载玻片上。 注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片（或黑色墙壁/透明底部96孔微孔板）上生长细胞。与Apopxin™Green孵育后，用Assay Buffer冲洗1-2次，然后将Assay Buffer加回到盖玻片（或黑色的壁/透明的底部96孔微孔板）中。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与Apopxin™Green孵育后，还可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。
   

3. 使用FITC滤光片在荧光显微镜下用Apopxin™Green分析凋亡细胞。当添加7-AAD时，使用Texas Red过滤器测量细胞活力，和/或当将CytoCalcein™Violet 450添加到细胞中时，使用DAPI或Violet过滤器测量细胞活力。质膜上的绿色染色表明Apopxin™Green与细胞表面的PS结合。

   22846	Cell Meter™细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 *三色荧光*	Cell Meter™ Multiplexing Live, Apoptotic and Necrotic Cell Detection Kit III *Triple Fluorescence Colors*	100 Tests
   22849	Cell Meter™TUNEL凋亡检测试剂盒*绿色荧光*	Cell Meter™ TUNEL Apoptosis Assay Kit *Green Fluorescence*	50 Tests