RNAsafe 高效 RNase 灭活剂

保存条件：－20℃保存半年以上。
产品介绍：
RNAsafe 含有数种特殊化合物，可使 RNase 失活，高效去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的 RNase，从而防止 RNA 的降解。RNAsafe 可用于制备 RNA 悬浮液，并可加入到各种 RNA 的反应液中（如体外转录、逆转录、RT-PCR、探针制备、分子杂交、Nuclease Protection Assay 等）。灭活可能存在的微量 Rnase 污染，保持 RNA 稳定性，获得更佳实验结果。
产品特点：
1. 适合于各种缓冲液，包括不能由DEPC处理的Tris及MOPS缓冲液系统等。
2. 安全，方便地去除溶液中微量的RNase。
3. 处理过的溶液随时可以再处理（60℃ 10-20 min），以去除任何可能发生的后续RNase污染。
4. 不影响逆转录酶、RNA聚合酶和耐热DNA聚合酶的活性，可用于逆转录和体外转录反应。
5. 处理后不需高压灭菌。
使用方法：
1. 本品为 20×浓缩液，在待处理的一般溶液或反应缓冲液中稀释 20×RNAsafe 到终浓度为 1×的工作浓度。如：95μl 待处理溶液中可加 5μl RNAsafe。
2. 60℃处理 20 min 以使 RNase 失活。经 RNAsafe 处理后的溶液冷却至室温即可使用。处理过的溶液可再次处理（60℃ 10-20 min），以去除存储过程中可能发生的 RNase 污染。溶液冷却到室温后再加入逆转录酶等对高温敏感的酶制剂。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。