PLANTaid 植物 RNA 助提剂

保存条件：常温运输，室温或者 4℃可保存 6 个月。

产品介绍：

植物助提剂 PLANTaid 是针对植物 RNA 提取时，针对富含多糖多酚等不容易清除的特点设计的一种多糖多酚植物 RNA 提取的辅助剂，主要成份为聚乙烯吡咯烷酮等高分子化合物。它们可以和多糖多酚等杂质结合，通过离心去除。它和绝大多数常用的使用高离序盐（chaotropic salts ）如异硫氰酸胍的 RNA 提取方法兼容。使用方法简便，只要在正常的 RNA 提取步骤中加一步骤即可。将 PLANTaid 加入裂解液后，研磨，匀浆，PLANTaid 和多糖多酚等杂质结合，离心将 PLANTaid，多糖多酚和任何不溶解的杂质去除,取上清就可以继续后面的正常RNA 提取步骤。

注意事项：

1.PLANTaid使用过量可能降低RNA产量，由于不同植物中所含多糖，多酚量变异性很大，因此用量应该在实验中适当调整。

2.如果处理的植物量特别少，按照下面比例计算所需裂解液＋PLANTaid 总体积少于200μl的情况下应该使用不少于200μl的总体积

来提取植物RNA，具体为175μl裂解液＋25μl PLANTaid= 200μl。

使用方法：

1.估计待处理植物体积的方法，我们按照100mg/100μl的比例来估计待处理植物体积。

2.查看使用的RNA提取手册（方法）的裂解液和植物处理量之间的比例

如果裂解液：植物处理量（体积比）≤9:1,则在所需裂解液中加入九分之一裂解液体积的PLANTaid;

如果裂解液：植物处理量（体积比）>9:1,则在所需裂解液中加入和植物处理量等体积的PLANTaid。

3.举例说明：

1）如果RNA提取手册上面裂解液：植物处理量=5:1,植物处理量为100mg(我们认为体积为100μl)，所需裂解液为100μl×5= 500μl，

再加入500μl×1/9＝55.6μl的PLANTaid. 2）如果RNA提取手册上面裂解液：植物处理量=10:1, 植物处理量为100mg(我们认为体积为100μl)，所需裂解液为100μl×10 = 1000μl，再加入100μl即和植物处理量等体积的PLANTaid。

3）使用上面的混和液按照正常操作步骤研磨，匀浆处理后，将裂解物用速（12000-14000rpm）室温下离心5 sec。不溶的细胞碎片，PLANTaid和它结合的多糖多酚等杂质可以通过此离心步骤去除。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。