RNAlong RNA 长期保存液

保存条件：4℃。
产品介绍：
RNA性质不稳定，极易降解。溶解于无RNase的TE 或水中的纯化RNA，即便是储存于-20 ºC也难免降解。为解决这一问题，可以将RNA沉淀或RNA溶液溶解于RNA 长期保存液中，允许RNA 4ºC保存或-20ºC至少保存1年而免于降解。RNA长期保存液是RNA样品运输和中长期保存的佳选择。需要时可用常规乙醇法沉淀回收RNA，或直接吸取储存于RNA 溶解保护液中的高浓度RNA(可达4 mg/ml)进行RNA 电泳、Northern Blot。
注意事项：
1. RNA 长期保存液可能抑制逆转录酶活性，做 RT-PCR 反应前应该用乙醇沉淀 RNA。
2. 在 RNA 长期保存液中的 RNA 的终浓度不应该超过 4μg /μl。用 RNA 长期保存液溶解 RNA 沉淀：
1. 对固体 RNA 沉淀，每 0.4-4μg RNA 沉淀加入 1μl RNA 长期保存液，反复吹打混匀或者室温振荡 15-30 min 溶解沉淀。干燥的 RNA 沉淀难以溶解，可反复吹打混匀后 50ºC 加热 10-15 min。先用小体积无 RNase 的TE 或水溶解 RNA 沉淀，然后按液态 RNA 操作。
2. 对液态 RNA 溶液，每 0.4-4μg RNA 溶液加入 1μl RNA 长期保存液，混匀。注意混合液中 RNA 长期保存液的体积百分比不低于 80%。
3. 测定 OD 值。注意加入相应量的 RNA 长期保存液做空白。
4. 将溶解的 RNA 样品储存于-20 ºC 或者-70 ºC。从 RNA 长期保存液中沉淀 RNA：
1. 估计 RNA 溶液终体积。加入 4 倍体积的无水乙醇，混匀。如果溶液体积过小，可加入 RNase free water 稀释 RNA 溶液,如果溶液中 RNA 含量低于 0.25μg /μl，可加入 5M NaCl(RNase free) 至终浓度 0.2M,混匀后再加入 4 倍体积乙醇。
2. 室温放置 5 min。
3. 12,000rpm 离心 5 min,弃上清,风干，溶解。
4. 重新沉淀的 RNA 溶解后可用于 RT-PCR 反应。也可用于任何其他实验。直接使用 RNA 长期保存液中的 RNA：直接吸取 RNA 长期保存液中的 RNA，进行普通或甲醛变性电泳和 Northern Blot。进行甲醛变性电泳时，最后上样的样品中的 RNA 长期保存液的浓度可高达 50%。
附：甲醛变性电泳样品准备： 临用前，混合水（87μl），甲醛（81μl），50%甘油/含 0.25 mg/ml 溴芬兰(48μl ) 和20X MOPS (24μl). 将上述混合液和 RNA 长期保存液中的 RNA 样品等体积混合，55 ºC 温育 10 min，按照标准的甲醛变性电泳过程上样。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。