V32108ELbCas12a Lyophilized Powder (SCREW CAP TUBES) 生化试剂
其他品牌 品牌
生产厂家厂商性质
南京市所在地
AZ 3146 (AZ-3146)
¥1986RNase Inhibitor(40U/ul)
¥280茉莉酸甲酯
¥1980Mithramycin A (Plicamycin) 光辉霉素A
¥680liangxingmeisuB Amphotericin B
¥3690Tetracyclin HCl 四环素盐酸盐(USP)
¥225Spectinomycin Hydrochloride
¥2000衣霉素 Tunicamycin
¥1780Phleomycin(20mg/ml)腐草霉素20 mg/ml
¥921Bialaphos 双丙氨膦
¥1800Plant Preservative Mixture (PPM)
¥480Aureobasidin A(AbA)金担子素A
¥1378LbCas12a (又名Cpf1)核酸酶来源于Lachnospiraceae bacterium ND2006菌株。LbCas12a是由crRNA介导的DNA核酸内切酶,在靶标双链DNA存在PAM (TTN) 序列的情况下,特异地剪切靶标双链DNA,使DNA双链断裂并生成粘性末端。而LbCas12a特异地剪切单链DNA靶标不依赖PAM序列。此外,双链或单链DNA靶标均能激活LbCas12a的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性),即当LbCas12a酶与crRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后,便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性,将体系中的任意序列ssDNA切碎。因此,LbCas12a酶不仅可用于体外dsDNA的特异剪切,也可用于靶标核酸的快速检测,详见本公司开发的HOLMES[1]核酸快检技术。
本产品将无甘油LbCas12a核酸酶冻干,可用于常温运输及保存,使用配套的冻干Cas酶复溶液复溶后,具有与本公司非冻干型LbCas12a (Cpf1) Nuclease(#32108)同等的反应活性。本产品包括可用于单个反应的酶冻干粉及冻干球等多种冻干形态,满足不同下游反应体系构建的需求。
产品组分
组分 | V32108E-01 | V32108E-02 |
● LbCas12a Lyophilized Powder (SCREW CAP TUBES) | 100 μg | 100 μg × 5 |
● LbCas12a Reconstitution Buffer | 200 μL | 1 mL |
◆ 建议使用 136 μL 复溶液复溶一管 100 μg 的 LbCas12a 冻干粉,复溶后酶浓度为 5 μM,即 5 pmol/μL。
保存条件
本产品常温保存及运输;复溶后于-20℃保存,避免反复冻融。
实验流程
1.冰上制备如下CRISPR反式剪切反应体系:
组分 | 体积 | 终浓度 |
10 × HOLMES Buffer 1 | 2 μL | 1 × |
5 μM LbCas12a Nuclease a | 1 μL | 250 nM |
10 μM crRNA | 0.5 μL | 250 nM |
1 μM Target DNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
10 μM HOLMES ssDNA Reporter(#31101) | 0.5 μL | 250 nM |
Nuclease-free water | Up to 20 μL |
a.V32108E 系列 LbCas12a 每管含有 100 μg 的 LbCas12a 冻干粉,建议每管加入 136 μL 复溶液,复溶后酶浓度为 5 μM,即 5 pmol/μL。
2.立即放入实时荧光定量PCR仪检测荧光信号,37℃反应,每30 sec采集一次荧光信号。
实验结果
2. 为防止 RNase 污染,请保持实验区干净整洁,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
3. 本产品仅包含 Cas 酶,CRISPR 反应体系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制备,10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推荐从 TOLOBIO 选购。
4. 复溶后的 LbCas12a 需在冰上配制反应体系,且使用后立即将酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一个月)。
5. 本产品仅供科研使用。