Dnase I(Rnase free)

该酶是将单链或双链 DNA 同等程度的随机分解，生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。由于RNase-free DNase I 中 Protease 已几乎被去除，从而提高了该酶在 pH 中性区域的稳定性。此外该酶中添加了
Rnase Inhibitor，用于抑制 RNA 样品中残留的 RNase 核酸酶，因此可以有效抑制 RNA 提取过程中 Rnase 酶对 RNA的降解。Stop Buffer 终止反应后，可通过一步加热失活DNase I 活性。

活性定义
在 50 μl 体系下，37℃ 10min 条件下消化 1 μg pBR322质粒 DNA 所需的酶量定义为 1 个活性单位。纯度
2 U 的本酶和 1 μg 的 16S, 23S rRNA 在 37℃、pH7.5 的条件下反应 1 小时，RNA 的电泳谱带不发生变化
应用：去除 RNA 样品中的 DNA 污染。
储存：-20°C 可保存 2 年。
操作方法（去除 RNA 中的基因组 DNA 污染）
1. 按以下组分配制反应体系
RNA 1~50 μg
10× RD Buffer 2 μl
Rnase Free DNase I (2 U/μl) 1 μl*
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*若 RNA 样品中含有超过 5 μg 基因组 DNA 污染，请使用2 μl 该酶。
2. 37°C 孵育 15min 以消化去除基因组 DNA。
3. 孵育完毕后加入 2 μl 10× RD Stop Buffer，混合均匀室温放置 1min，并置于 75°C 10min 加热失活 DNase I。样品可直接用于下一步反转录等试验。
注意：
1）通常加热方法即可失活 DNase I。如需要去除残留的变性蛋白，可在 37°C 消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀 RNA样品（不进行加热操作）。
2）10× RD Stop Buffer 中含有螯合剂用于去除二价阳离子，进行加热失活前，必须加入 2 μl 10× RD Stop Buffer 并混合均匀，再进行热失活，否则会导致 RNA 降解。
3）处理完毕的 RNA 样品进行一步反转录反应时，添加量需要<20%（如 20 μl 的反转录体系中加入量要<4 μl）

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，第链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。