SUMO 蛋白酶

也称为 UIP 蛋白酶（分子量 26kD），是一种具有较高活性的半胱氨蛋白酶。SUMO 蛋白酶以一种非常特异的方式切割蛋白，它特异性识别 UBL 蛋白的三级结构－SUMO，而不是氨基酸序列，故该蛋白酶可以切割重组融合蛋白的 SUMO。切割的温度为 30°C，该酶作用温度和 PH 范围（pH7-9）都比较广泛。酶切后，可通过Ni-NTA Resin 亲和纯化很容易地将 SUMO 去除。该 SUMO蛋白酶是自 E.coli 表达经亲和纯化的重组蛋白酶，含有 His标签。

活性定义：在 1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl,pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中，30°C 反应 1h，剪切>85％的 100pmol 底物，所需要的酶量定义为一个活性单位。
储存：SUMO 蛋白酶置于-20°C 可保存 2 年。

2. 混匀上述体系后于 30°C 孵育 1-16 小时。若蛋白为热不稳定性，请在 4°C 孵育较长时间或增加酶用量。
3. 取样品进行 SDS-PAGE 分析。
注意事项
为达到好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白，SUMO 蛋白酶所需 NaCl 的浓度不同的蛋白情况会有所差别，可根据实际情况在0～300mM 之间调节 NaCl 的浓度以达到的效果。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。