预染发光Western Marker

描述：

传统的 Western Blot 试验需要使用预染蛋白 Marker 来跟踪检测阳性抗原信号和转膜效率，但预染蛋白 Marker 无法在胶片上曝光，曝光信号需要根据膜上的预染蛋白 Marker来判断。全新研发的Prestained & Western Blot Marker是专门为 Western Blot 试验设计的分子量标准，由 9 种发光蛋白和 9 种预染蛋白组成；9 中发光蛋白分别为 23、30、36、44、50、62、90、120 和 160KDa，这些蛋白均可与抗体结合, 因此能与抗原在同一张膜上曝出信号，阳性信号可以直接通过 Western Marker 的位置来判断；9 种预染蛋白分别为 15、25、35、40、55、70、100、130 和 180KDa，其中 70KDa为红色，其他为蓝色，转膜完毕后在膜上肉眼可见。主要特征
可与抗原同时检测信号，使 Western blot 结果判断更加简便发光 marker 没有偶联和标记其他分子，分子量更加准确综合发光 marker 和预染 marker 的优势，既能监测转膜又能与抗原同时检测
储存：-20°C 保存，有效期 2 年。
使用方法
待 Prestained & Western Blot Marker 至室温融化后，取 2~10 μl（通常 5μl）至上样孔中，进行 SDS-PAGE 电泳；电泳完毕后转至 PVDF 膜或 NC 膜，与一抗二抗孵育；孵育完毕后，将本品与抗原一起通过 ECL 曝光至胶片或荧光显色。
注意事项：
1. 本产品可直接使用，不需要加热。
2. 可根据抗体的效价或曝光时间的长短调整 Prestained & Western Blot Marker 的上样量。
3. 使用新配制的凝胶，及时更换电泳缓冲液和转膜液，以免影响实验结果。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。