10min病毒DNA/RNA提取试剂盒

该取试剂盒采用裂解液，可快速可靠的从粪便、淋巴液、血清、血浆样本中纯化出高纯度的病毒 DNA/RNA。应用本试剂盒提取的 DNA/RNA 可直接用于反转录、One-Step RT-PCR、文库构建等多种分子生物学实验。

注意事项：
（1） 首本试剂盒中的 Washing Buffer 中已经加乙醇，无需单独添加。
（2）Virus DNA/RNA LB1，储存时可能会有白色结晶沉淀，放置于 56℃水浴锅溶解后，不影响使用效果。
（3）蛋白酶 K（20 mg/ml）长期保存请储存于-20℃，短期室温保存（6 个月），其它组分储存于室温。
（4）该试剂盒的保质期为 2 年。
操作方法
（1）在 1.5mL 离心管（自备）中加入 200μL 病毒液 （粪便提取液、血清、血浆等），加入 50μL Virus DNA/RNA LB1和 20μL 蛋白酶 K，漩涡混合均匀，室温消化 5min。
（2）消化完毕后，向上述样本中加入 700μL Virus DNA/RNABB2，漩涡混合 1min。
（3）将上述混合液全部倒入到吸附柱中，13000rpm 离心1min。
（5）倒掉废液。向吸附柱中加入 500μL Washing Buffer，13000rpm 离心 15s。重复此步骤。
（6）将吸附柱重新放回离心机，13000rpm 空离心 1min，将残留的乙醇甩干。
（7）将吸附柱芯放入到 1.5mLRnase Free 收集管中，向吸附柱芯中加入 30~80μLNucleaseFree，13,000rpm 离心1min，洗脱液即为 DNA/RNA 产物，冷冻保存。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。