5min极速RNA提取试剂盒

本试剂盒采用的裂解液，可快速可靠的从细胞、动物组织、植物组织、病毒液样本、抗凝全血、培养细菌中纯化出高纯度的总 RNA。该试剂盒是目前国际上操作步骤最少、用时最短的 RNA 提取试剂盒（ 5 分钟）。应用本试剂盒提取的 RNA 可直接用于反转录、基因克隆、定量检测、文库构建、杂交等多种分子生物学实验。
注意事项：
(1) 本试剂盒中的 Washing Buffer 中已经加乙醇，无需单独添加。
(2) RNA LB1 和 RNA BB2 均具有腐蚀性，注意防护。操作方法
（1）裂解/上柱（1.5ml EP 管中处理）培养细胞：消化完毕后，离心收集细胞沉淀，用 20~30μl 水或PBS 重悬细胞沉淀（务必重悬充分）。加入 120μl RNA LB1 漩涡混匀 30s(有未溶解的细胞团块，用枪头吹打，助溶解)，加入 500μlRNA BB2 上下颠倒混合均匀，倒入吸附柱中。13000rpm 离心 30s，倒掉废液，进行后续洗涤/洗脱步骤。
组织样品----采用研钵进行研磨：用液氮研磨粉碎组织样本，将研磨粉碎的样品加入到 200μl RNA LB1 中，漩涡混合均匀 1min（有块状组织未溶解的，要使用枪头吹打，助消化），加入 500μl RNABB2 上下颠倒混合均匀，13000rpm 离心 15s。将上清倒入吸附柱中（动作需轻柔，勿将未消化的组织块倒入吸附柱），13000rpm 离心 30s，倒掉废液，进行后续洗涤/洗脱步骤。
组织样品----采用钢珠进行研磨：将组织样品加入到 300μl RNALB1 中（1.5ml EP 管），并加入几粒钢珠，置于组织研磨仪中，研磨 1~2min。向研磨后的匀浆液中加入 750μl RNA BB2，漩涡混匀5s，13000rpm 离心 1min。用 1ml 吸头吸取 750μl 上清液到吸附柱中。13000rpm 离心 30s，倒掉废液，进行后续洗涤/洗脱步骤。注意：植物组织的匀浆效果通常较动物组织差一些，所以一般推荐采用液氮条件下研钵来研磨。在采用钢珠研磨的条件下务必将组织研磨粉碎，否则会导致产率降低。病毒液 /体液 /血清 /血浆：吸取 150μl 病毒液/体液样品到加入到120μl RNA LB1 中，漩涡混合均匀 30s。直接加入 500μl RNA BB2中，漩涡混合均匀 15s。倒入吸附柱中，13000rpm 离心 30s，倒掉废液，进行后续洗涤/洗脱步骤。
培养细菌：收集菌体后，用 20~30μl 水重悬菌体（务必重悬充分），加入 120μl RNA LB1 漩涡混匀 30s，加入 500μl RNA BB2 上下颠倒混合均匀，倒入吸附柱中。13000rpm 离心 30s，倒掉废液，进行后续洗涤/洗脱步骤。
（2） 洗涤和洗脱
向吸附柱中加入 500μl Washing Buffer，13000rpm 离心 15s。重复此步骤一次。 将吸附柱重新放回离心机，13000rpm 空离心1min，将残留的乙醇甩干。 将吸附柱芯放入到 2mL NucleaseFree 收集管中，向吸附柱芯中加入 20~50μl Nuclease Free H2O，室温放置 1min，13,000rpm 离心 1min，洗脱液即为提取的 RNA，冷冻保存。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。