Bst 4.0 Basic Bead

该制品为全体系冻干微球制品，内含恒温扩增所用的反应缓冲液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，其不包含任何染料，使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依赖于 RNA 模板的聚合酶活性（逆转录），还具有依赖于DNA 的聚合酶活性，因此无论 DNA 或 RNA 样本均可使用该制品进行恒温扩增。该制品是进行 LAMP 及RT-LAMP 扩增反应的试剂。
本制品不包含任何显色染料，可自行搭配相关染料或检测手段进行 LAMP 反应，包括搭配 OG 染料管进行橙绿变色、搭配标记 Oligo 进行试纸条检测、搭配荧光染料进行荧光检测、搭配 Molecular Beacon 探针进行荧光检测等方法。
储存：-20℃保存 2 年；室温（25℃）保存>6 个月。
使用方法：（进行 LAMP 橙绿变色扩增）：
1. 关于 OG 橙绿变色管说明：橙绿变色染料（OG Dye）以烘干的形式预加在8联管盖上。LAMP反应完毕后，将 0.2ml EP 管颠倒溶解 OG 染料后。LAMP的反应产物将与 OG 染料形成绿色肉眼可见变色反应（阳性），而未扩增的 EP 管为深橙色（阴性）。本试剂管常温长期保存。
2. 配制变色 LAMP 反应体系
在 OG 染料管（0.2ml EP）反应管中加入下述试剂
Bst4.0 Basic Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl
10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、
注意：全部试剂加入完毕后，轻弹 EP 管底部后，再盖上 OG 橙
3. 反应体系配好后，置于 65°C 进行反应 15~30min。（扩增良好的引物组合，通常 20min 即可变色，一般不超过30min）。
4. 观察结果：反应结束后，从加热装置中将反应管取出，室温 2min，使整个反应管冷却下来。再次用力将反应管
注意：
（1）观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。
（2）尽管  选取的为高密封
注意事项：
（1）关于矿物油的使用，在配制完 LAMP 反应体系后，可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部，以减少气溶胶的污
（2）在使用其它荧光染料时，使用浓度可自行优化，通染料可能导致扩增失败。
（3）本试剂不支持，浊度、pH 变色、HNB 变色反应，请勿尝试。
（4）关于 LAMP 成品试剂的建议， Bst 4.0 Basic Bead冻干球和 OG 橙绿变色管均为室温稳定状态，可长期保存。将扩增引物加入到 OG 橙绿变色管底部，于 70°C 烘干，再加入一粒冻干球即可制备成全体系检测试剂。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。