Bst 2.0 DNA/RNA polymerase

储存条件：-20℃保存

产品简介：

Bst2.0 DNA/RNA聚合酶是嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）DNA聚合酶I大片段（Bst LF）经过基因突变改造过的聚合酶。该酶具有5’-3’的DNA聚合酶活性和链置换活性，无5’-3’核酸外切酶活性。与野生型Bst LF DNA聚合酶相比，Bst 2.0 DNA/RNA聚合酶的热稳定性、扩增速度、链置换速度和耐盐，耐dUTP等性能都有很大的提升。Bst2.0 DNA/RNA聚合酶还具有逆转录活性。非常适合LAMP类型的等温扩增实验。

活性单位： 一个活力单位（1 U）即在 65°C 条件下，30 分钟内催化 25 nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

质量控制：SDS-PAGE 检测纯度大于99%，经检测无核酸外切酶，内切酶活性，无细菌基因组DNA残留。通过各种模板进行等温扩增测试。室温存放一周，无明显活性改变。

应用范围：

1.DNA或RNA为模板的LAMP等温扩增。

2.适用于链置换方法扩增DNA。

3.高GC结构DNA的测序和微量DNA模板快速测序。

10×Bst Buffer：200 mM Tris-HCl，100 mM (NH4)2SO4，500 mM KCl，80mM MgSO4，1% Tween? 20

pH 8.8@ 25°C。

储存缓冲液：10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.1% Triton? X-100，pH 7.5 @ 25°C。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。