1×Taq PCR MasterMix(purple)

产品介绍： 1×Taq 预混液中包括TaqDNA 聚合酶，dNTPs，染料及PCR 反应所需的缓冲液，是一种即用型PCR 扩增试剂。使用时，只需加入引物和DNA 模板即可进行PCR 扩增, 引物和模板的加入总体积可以在 1-10µl 间变动，具有很强的可调性。该PCR 预混液能节省实验时间， 避免了常规 PCR 试剂多次加样 造成的实验污染。预混液本身含有染料，扩增完成后可直接上样，进行电泳检测。

保存条件：-20℃保存，有效期一年。
产品用途：
常规PCR 扩增，菌落PCR，TA 克隆用的PCR 片段扩增，RT-PCR。
PCR 扩增体系：
1.单个样本扩增时，按右表中所列顺序添加其它成分。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底，将反应管置于 PCR 仪中进行扩增。
2.多个样本扩增时，可以在一个离心管中混合引物和1×TaqMasterMix，然后按比例分装。例如需要 10个 50μl 体系的 PCR 扩增，每个样本的模板量需加5μl，按左表中所列的量混合引物和 1×TaqMasterMix，然后分 45μl 到每个 PCR 管中，最后一一对应加 5μl待扩增的模板 DNA。离心数秒使反应混合物沉到管底，将反应管置于 PCR 仪中进行扩增。

PCR 循环设置：

*菌落PCR 时，94℃预变性5 分钟，用于裂解细胞，失活核酸酶
*退火温度则需按其引物的Tm 值来进行调整，一般
为Tm-5
*PCR 扩增产物用于TA 克隆时，72℃延伸15 分钟为好
扩增模板：低复杂基因组模板（质粒、病毒、λ和BAC DNA 等）,50 μl 体系中添加10-100 ng；高复杂基因组模板，50 μl 反应体系中，模板的使用量应在 100-500 ng；cDNA 模板的添加量不要超过PCR反应体系的1/10，50 μl PCR 反应体系中RT 产物的加入量为2-3μl，不要超 过5 μl。
结果检测：PCR 反应结束后，5-10 μl 扩增产物用含0.5 μg/ml 溴化乙锭（或合适浓度的其它 DNA 染色试剂），合适浓度的琼脂糖凝胶电泳检测，电泳完成后在紫外透射仪下观察并记录结果。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。