2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

储存条件：-20℃保存。

制品说明： 本产品包含 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为 2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等 优点，可限度的减少人为误差。使用时只需加入 DNA 模板和引物既可。 本产品使用方便快捷，能避免 PCR 操作过程中的污染，使用时只需取适量 2×Taq PCR Master Mix 溶液，加入模板和引物， 并加入去离子水补足体积，使 Master Mix 溶液浓度为 1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。专 用于聚丙烯酰胺凝胶检测。

产品内容：
0.05units/µl Taq DNA Polymerase (recombinant)、 4mM MgCl2、0.4mM dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
质量控制：
经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余 DNA ；能有效地扩增人基因中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显
活性改变。
适用范围：
本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测，半定量 PCR 实验和微量 DNA 的检测。
DNA 扩增和一些有特殊结构的复杂模板和 GC 含量高（>60%），有二级结构等的扩增：DNA 片段的 PCR 扩增、DNA 标记、
引物延伸、序列测定等。PCR 产物带 A，纯化后可直接用 TA 克隆。
PCR 反应举例：
（提示：以下举例仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况，设定反应条件。）
1．用 2×Taq PCR Master Mix 产品，以人基因组 DNA 为模板，扩增 1kb 的片段，反应体系为 25µl（如反应体系不同，可按此比例增加或减少用量）。

一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成         等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；

五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；

六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。

七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。

八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

①Oligo dT
选择Oligo dT时，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，对RNA样品的质量要求较高，不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物（GSP）是某个基因序列的一部分，与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合，每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此，当分析多种目标时，则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同，所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物，建议对退火温度进行优化。